对您的超分辨率成像研究来说，没有什么比顶级质量的一抗更好，它经过全世界知名研究人员的验证，并结合了高质量的染料，旨在完美满足STED超分辨率显微镜的特定要求。这里，我们展示了一组在神经科学领域应用最广泛的SYSY一抗，它可直接与相应的一对abberior STAR染料耦合，从而优化STED显微镜。
| Cat. No. | Product Description | Application | Quantity | Price | Cart |
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| 141 111AbOR | Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 |   |
| 141 111AbRED | Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 160 111AbOR | Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 160 111AbRED | Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 162 311AbOR | Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 162 311AbRED | Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 106 011AbOR | Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 106 011AbRED | Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 104 211AbOR | Synaptobrevin2, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 104 211AbRED | Synaptobrevin2, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 101 011AbOR | Synaptophysin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 101 011AbRED | Synaptophysin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 105 011AbOR | Synaptotagmin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. K.D. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 105 011AbRED | Synaptotagmin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. K.D. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 139 017AbOR | VAChT, rat, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 139 017AbRED | VAChT, rat, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 131 008AbOR | VGAT, rabbit, monoclonal, recombinant IgGrecombinant IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. cytoplasmic domain | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 131 008AbRED | VGAT, rabbit, monoclonal, recombinant IgGrecombinant IgG, AbberiorStar RED K.O. cytoplasmic domain | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 135 421AbOR | VGLUT2, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 135 421AbRED | VGLUT2, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
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• 简介
• 神经传递/化学突触的结构
• STED显微镜
• STED成像成功的先决条件
• 直接耦合的优势
• 满足 STED 超分辨率显微镜特定要求的 SYSY 抗体
• 参考文献
突触的结构和功能已成功被揭示良久。然而，传统显微镜技术中的衍射屏障限制了分辨率，从而也限制了我们对突触结构和功能的了解。超分辨率显微镜大大提高了可视化突触结构的精度。这种能力改变了我们在突触间隙、活跃区和突触后致密区中详细检查蛋白质空间组织的能力。这有助于在分子水平上研究突触成分的异质性和动态。
图1A：在STED显微镜下，用abberior STAR红色标记的突触前Bassoon和用abberior STAR橘色标记的突触后Homer1显示出完全分离的突触结构。
图1B：Bassoon和Homer1的突触定位示意图
神经元必须快速而准确地传递信息；它们负责快速传递来自我们身体各个部位的信号，从我们的脚趾尖到大脑，在那里这些信息被处理。为了实现如此快速和精确的通信，突触可优化其处理高要求和间歇性信号处理的能力。
化学突触是脊椎动物中发现的主要突触类型，是一种不连续的结构，由突触前神经元和突触后神经元组成，由约15 - 20nm宽的突触间隙隔开。化学突触的信号传递通过突触囊泡循环进行。在突触囊泡和活跃区发现的特殊蛋白质在协调突触囊泡循环中扮演着重要的角色。SNARE蛋白，例如Syntaxin、Synaptobrevin和SNAP-25，参与突触囊泡与质膜的融合。支架蛋白如Bassoon, Piccolo和RIM，可组织并招募突触囊泡到质膜附近。突触蛋白可通过结合细胞骨架蛋白协助突触囊泡移动，而复合蛋白则可阻止囊泡的自发融合。此外，CAPS（钙活化分泌蛋白）可促进钙信号与突触囊泡融合的耦合(Chua et al., 2010, Jahn and Fasshauer, 2012)。
突触后致密区（PSD）是一个富含蛋白质的特殊区域，在接收突触前神经元的神经递质信号和启动突触后反应中起着关键作用。神经递质受体在突触后致密区（PSD）内含量丰富，可在每个突触上组成不同的群体，并主要由突触前神经元释放的神经递质决定。这种受体释放的神经递质配对控制着每个特定突触的电特性。此外，各种类型的支架蛋白，如PSD-95、Shank和Homer，在突触后致密区内锚定和组织信号分子、受体和结构蛋白上起着至关重要的作用(Takamori et al., 2006, Chua et al., 2010)。
突触间隙主要由细胞外基质和其他非蛋白成分填充。其中包括细胞粘附分子，如钙粘蛋白、整合素、神经素（存在于突触后膜）和神经素（存在于突触前膜）。它们共同介导突触粘附并在突触的形成和功能中扮演着重要角色。额外的细胞外基质蛋白，如层粘连蛋白、胶原蛋白和蛋白聚糖，则有助于组织和稳定突触连接（Dankovich and Rizzoli, 2022）。
显微镜技术的进步，特别是超分辨率技术，使得可视化突触具体细节成为可能。这些技术令科学家们观察到特定的蛋白质相互作用以及突触和突触囊泡的异质性，从而大大加深了我们对这些复杂生物结构的理解(Binotti et al., 2024, Upmanyu et al., 2022, Nishimune et al., 2016, Willig et al., 2006)。然而，突触结构和功能在许多方面仍未解决。例如，突触前活性区（AZ）的精细结构，分子簇的重要性以及突触囊泡循环的动态和分子机制仍未得到完全阐释(Nosov et al., 2020)。
在纳米光学显微镜技术出现之前，特别是在STED（受激发射损耗）显微镜的发展之前，研究人员受到传统光学显微镜衍射极限的限制。这一限制将分辨率限制在横向约200-300纳米和轴向约500-700纳米。STED显微镜的概念由Stefan Hell和Jan Wichmann于1994年提出，并于2000年在实验上实现(Hell and Wichmann, 1994, Klar et al., 2000)。STED显微镜是基于传统的共聚焦激光扫描配置，但包括除了一个激发激光器，还有第二个红移和甜甜圈形状的STED激光器，且其中心强度为零。这样，所有的分子除了甜甜圈中心的分子外都被耗尽了。这种配置确保了被中心光束激发的荧光团可迅速被STED光束去激发，而任何荧光都来自STED甜甜圈中心的荧光团。荧光信号被锐化，且横向分辨率达到30-70纳米。衍射势垒则会被打破。
一个好的成像结果取决于两个条件：好的荧光染料和特异性抗体。一个理想的STED荧光探针必须具备几个关键属性：对STED光束的响应性，有效的去激发，优化吸收和发射光谱，与STED系统中可用的激光线对齐，在重复激发和去激发循环中耐光漂白。为了得到最佳的STED成像，abberior，STED染料的先驱公司，提供了特殊优化的荧光染料。该染料拥有卓越的光稳定性，量身定制的光谱特性，高效的耗尽能力，高量子产率，与生物样品的兼容性以及最小的背景噪声，abberor STAR ORANGE和STAR RED是双色STED @775 nm的完美组合。
为在STED显微镜中实现高空间分辨率，选择用于染色有活力或经固定样品的抗体至关重要。SYSY抗体显示出高特异性和亲和力，使它们成为显微镜分析精确而强大的工具。使用特性良好的单克隆抗体，结合到具有高特异性的单个表位，可减少染色模式的变异性和与其他蛋白质或分子交叉反应的潜力。
与使用标记二抗的间接标记相反，直接耦合显示了一系列的优势。除了可消除对二抗的需求外，直接耦合还减少了位阻，从而在间接标记中可降低一抗对目标的亲和力和特异性。此外，它通过与非靶蛋白的非特异性二级结合（交叉反应性）而减少了背景噪声，也减少了荧光团与抗原之间的距离，并可通过与单一一抗的多个二级结合从而阻止掩蔽单个分子的空间排列(Früh et al., 2021)。
图3：一抗的直接耦合（一步，B）减少了空间位阻、荧光团距离和表位掩蔽，这可能是使用耗时的二抗两步染色 （A）而发生的。
使用从SYSY耦合到abberior STAR染料的一抗可进一步提升您的STED显微镜体验。
| Cat. No. | Product Description | Application | Quantity | Price | Cart |
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| 141 111AbOR | Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 141 111AbRED | Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 160 111AbOR | Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 160 111AbRED | Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 162 311AbOR | Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 162 311AbRED | Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 106 011AbOR | Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 106 011AbRED | Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 104 211AbOR | Synaptobrevin2, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 104 211AbRED | Synaptobrevin2, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 101 011AbOR | Synaptophysin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 101 011AbRED | Synaptophysin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. K.D. | ICC | 50 µg | US$470.00 | |
| 105 011AbOR | Synaptotagmin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. K.D. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 105 011AbRED | Synaptotagmin1, mouse, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar RED K.O. K.D. | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
| 139 017AbOR | VAChT, rat, monoclonal, purified IgG IgG, AbberiorStar ORANGE | ICC | 100 µg | US$470.00 | |
Binotti et al., 2024: ATG9 resides on a unique population of small vesicles in presynaptic nerve terminals. PMID: 37881948
Chua et al., 2010: The architecture of an excitatory synapse. PMID: 20200227
Dankovich and Rizzoli, 2022: The Synaptic Extracellular Matrix: Long-Lived, Stable, and Still Remarkably Dynamic. PMID: 35350469
Früh et al., 2021: Site-Specifically-Labeled Antibodies for Super-Resolution Microscopy Reveal In Situ Linkage Errors. PMID: 34184536
Hell and Wichmann, 1994: Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated-emission-depletion fluorescence microscopy. PMID: 19844443
Jahn and Fasshauer 2012: Molecular machines governing exocytosis of synaptic vesicles. PMID: 23060190
Klar et al., 2000: Fluorescence microscopy with diffraction resolution barrier broken by stimulated emission. PMID: 10899992
Nishimune et al., 2016: Dual-color STED microscopy reveals a sandwich structure of Bassoon and Piccolo in active zones of adult and aged mice. PMID: 27321892
Nosov et al., 2020: The Decade of Super-Resolution Microscopy of the Presynapse. PMID: 32848695
Takamori et al., 2006: Molecular anatomy of a trafficking organelle. PMID: 17110340
Upmanyu et al., 2022: Colocalization of different neurotransmitter transporters on synaptic vesicles is sparse except for VGLUT1 and ZnT3. PMID: 35263617
Willig et al., 2006: STED microscopy reveals that synaptotagmin remains clustered after synaptic vesicle exocytosis. PMID: 16612384
